葡萄品种、种植条件、葡萄酒酿造工艺和贮藏条件和时间等因素对葡萄酒中的酚类含量和种类影响较大。

2 结果与分析2.1 不同处理对红香酥梨贮期果实品质的影响硬度是衡量果品贮藏品质的重要指标之一。红香酥梨果肉中的有机酸主要是苹果酸，它是核果类水果的主要呈味物质。

随着贮藏天数的延长，果皮亮度L*值逐渐升高，色调角h逐渐下降，表明果皮颜色逐渐油腻变亮、底色由绿逐渐转黄，预示果实衰老。急速降温套PE打孔袋（0AⅡ）与急速降温裸果入库处理（0CKⅡ）相比在贮藏前期硬度下降较快，到60 d时硬度比0CKⅡ低0.18 kg/cm2，过后0AⅡ硬度下降速度减缓，90 d时两者硬度大致相同，90 d后0AⅡ硬度一直高于0CKⅡ。如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系删除相关链接：有机酸，可溶性，代谢。从图4可以看出，贮藏期间，红香酥梨的可滴定酸随时间变化不大，各处理间未发现显著差异。4个处理的可滴定酸含量变化趋势相似：除0AⅡ保持不变外，其他3个处理贮藏前30 d可滴定酸含量均有所上升，上升幅度0CKⅡ0CKⅠ0AⅠ。

缓降温处理促进了鸭梨L*值、a*值的升高以及h的降低，使果皮亮度增加、底色变黄。同时期a*值除了90、240 d时0CKⅡ0AⅠ外，其余时期都遵循0CKⅠ0AⅠ0CKⅡ0AⅡ，0CKⅠ和0AⅠ除在240 d差异显著外，其他时间都差异不显著（P0.05）。声明：本文所用图片、文字来源《中国测试》2020年10月，版权归原作者所有。

以大肠杆菌为例，同一大肠杆菌样本在不同种类培养基上可能得到差异显著的计数结果。1.2 大肠杆菌标准物质的制备与测定方法根据本实验室先前的制备工艺制备大肠杆菌标准物质。长期稳定性检验温度为20℃，考察时间为6个月（分别为第0,1,2,4,6个月）。接下来，按照先密后疏的原则，对标准物质的长期稳定性进行评估。

0 引言食品微生物检验是构建我国食品安全和生物安全体系的重要支撑和保障。该标准物质基于PCA培养基的标准值为(7.11.1)103 CFU/g，基于VRBA培养基的标准值为(6.11.0)103 CFU/g。

而菌落总数和大肠菌群指标是食品微生物检验中最基本、最常见的检测项目。国家标准规定菌落总数和大肠菌群的检测分别需要平板计数琼脂（plate count agar,PCA）培养基和结晶紫中性红胆盐琼脂（violet red bile agar,VRBA）培养基，因此这两种培养基的质量直接影响菌落总数和大肠菌群检测结果的准确性。研制的大肠杆菌标准物质将具有两种特性量值，可以用于PCA培养基和VRBA培养基生长率的评价。即待测PCA培养基的生长率应满足PR0.84的要求。

根据式（1）计算待测PCA培养基和VRBA培养基的生长率。使用天平称量4.5 g无菌蒸馏水复溶标准物质，然后用PBS对样品匀液进行10倍系列稀释。使用不同品牌的PCA培养基（A1～A5）和VRBA培养基（B1～B5）、以及参比培养基TSA，分别对3个单元的大肠杆菌标准物质进行测定。随后10 000g离心5 min，弃去上清液，菌泥用PBS重悬并稀释，得到适宜浓度的大肠杆菌菌液。

每次从20℃抽取3个单元，使用PCA培养基和VRBA培养基进行测定。1.5 标准物质的定值依据JJF 13432012和CNAS-GL292010的要求，标准物质经由6家通过CNAS认可的实验室合作定值。

接下来使用PCA倾注平板法或VRBA倾注平板法进行大肠杆菌数量的测定。选择3个适宜稀释度，每个稀释度分别吸取1 m L样品悬液接种于无菌平皿，每个稀释度至少重复3次。

N0大肠杆菌标准物质基于PCA（或VRBA)培养基的标准值。1.4 标准物质稳定性评估稳定性考察主要涉及标准物质在运输过程中的稳定性、客户端的贮存条件和使用有效期。冻干结束将样品压盖密封，得到大肠杆菌标准物质200个单元，规格为0.5 g/瓶。每家实验室分别使用PCA培养基和VRBA培养基测定3个单元的标准物质，每个标准物质重复测量3次，测量方法参考1.2节。大肠杆菌标准物质的标准值为6家实验室测量结果的平均值。生长率是培养基质量控制的关键指标之一。

1.1.4 试剂磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution,PBS,p H 7.20.2）、营养肉汤培养基、胰蛋白胨大豆琼脂（tryptose soya agar,TSA）培养基：北京陆桥技术有限责任公司。检验温度分别为20℃和4℃，考察时间为7 d（分别为第0,1,3,5,7 d）。

将大肠杆菌标准菌株接种于营养肉汤培养基，37℃、200 r/min培养12 h。该方法费事费力，重复性和再现性有待提高。

如涉及作品内容、版权等问题，请与本网联系删除相关链接：平板计数琼脂，大肠杆菌，谷氨酸钠，标准物质。电子天平：BS224S型，德国赛多利斯公司。

高压灭菌锅：HG-50型，日本Hirayama公司。离心机：1-14型，德国赛多利斯公司。现行的生长率评价方法来自国标GB 4789.282013《食品安全国家标准食品微生物学检验培养基和试剂的质量要求》。这3个标准物质难以满足PCA培养基和VRBA培养基生长率评价的需要。

综上所述，研制的大肠杆菌标准物质可以用于多种培养基的生长率评价，具有方便快捷的优点。综上所述，本文选用大肠杆菌标准菌株作为评价菌株，将其制备成标准物质。

实验结果表明：大肠杆菌标准物质的均匀性和稳定性良好，可以在20℃下稳定保存6个月。1.6 评价PCA培养基和VRBA培养基的生长率的方法使用PCA（或VRBA）培养基，对一个单元的大肠杆菌标准物质进行3次重复测量，并根据下式计算大肠杆菌在该培养基上的生长率：式中：PR待测PCA（或VRBA）培养基的生长率。

目前我国仅有的3个有证大肠杆菌标准物质GBW(E)091094、GBW(E)091095、GBW(E)091096都是基于单种培养基进行定值和使用的。该标准规定，PCA培养基和VRBA培养基的生长率评价都需要使用大肠杆菌作为质控菌株。

1.7 不同品牌培养基生长率的评价根据GB 4789.282013[9]的规定，PCA培养基和VRBA培养基的参比培养基均为TSA培养基。随机抽取11个单元的标准物质，分别使用PCA倾注平板法和VRBA倾注平板法对每个单元标准物质的大肠杆菌数量进行测定，每瓶样品重复检测3次。VRBA培养基：品牌分别为北京陆桥、广东环凯、青岛海博、美国BD、英国Oxoid，随机编号为B1、B2、B3、B4、B5。海藻糖、蔗糖、谷氨酸钠、麦芽糊、抗坏血酸钠：分析纯，Sigma公司。

恒温振荡培养箱：HZQ-X100型，江苏太仓市实验设备厂。首先，对标准物质的短期稳定性进行评估。

鉴于此，为了快速高效评价PCA培养基和VRBA培养基的生长率，需要研制量值精确、均匀稳定的大肠杆菌标准物质。使用PCA培养基或VRBA培养基测定标准物质的方法参考GB 4789.22016《食品安全国家标准食品微生物学检验菌落总数测定》或GB4789.32016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》第二法。

每次从20℃和4℃下分别抽取3个单元的标准物质，使用PCA培养基和VRBA培养基进行大肠杆菌数量测定。恒温培养箱：DNP-9272型，上海精宏实验设备有限公司。